天辰娱乐_天辰娱乐_login注册登录-开发出治疗帕金森病新策略！包覆基因-化学纳米复合物的外泌体可以清除α突触核蛋白和激活帕金森病免疫(主管:QQ66306964 主管:skype live:.cid.6c7b79dae5ec9830)新博2娱乐开发出治疗帕金森病新策略！包覆基因-化学纳米复合物的外泌体可以清除α突触核蛋白和激活帕金森病免疫

　　对于神经退行性疾病，可以利用基因和小分子药物协同清除引起神经元变性的病理物质。

　　在帕金森病(Parkinson s disease, PD)中，α突触核蛋白 (α-syn)聚集物被认为是主要的病理物质。siRNA在罕见疾病或没有良好药物选择的疾病中表现出潜力，但与基因相关。例如，针对SNCA的siRNA (siSNCA)可以通过下调α-syn蛋白的合成来抑制α-syn聚集物的形成。神经保护小分子药物姜黄素对已有的α-syn聚集物具有降低作用。因此，siSNCA与姜黄素联合可以协同降低α-syn聚集物对PD治疗多巴胺能神经元的细胞毒性。然而，因为它们的吸收能力差，新陈代谢快，这些生物利用度较差的药物难以在靶神经元的作用部位聚集。此外,脑输送问题主要表现为输送系统难以通过血脑屏障(BBB)，不能准确识别靶细胞。

　　合成基因和化学药物(gene-chem)纳米复合物，包括脂质体和聚合物颗粒，已被修饰为细胞穿透多肽或细胞靶向分子，以增强药物输送在脑疾病或其他疾病的治疗。然而，合成的纳米复合物容易被识别为外来物，导致自然免疫激活、细胞凋亡、血液循环时间短，不安全且效率低。此外，当这些合成载体被内化时，会经历一个内溶酶体途径，这往往导致药物降解和胞外作用，并导致炎性小体激活。此外，有必要控制药物在病变区域的释放，以减少非特异性毒性。因此，为了有效地将基因化学药物递送到靶细胞的作用部位以实现PD的安全治疗，有必要开发一种能够克服这些递送瓶颈的递送系统，包括低血脑屏障通透性、神经元靶向性差、胞浆内吞效率低下和药物释放不可控等。

　　为了实现上述目标，作者设计了一种靶向外泌体涂层基因-化学纳米复合物，作为神经元α-syn聚集物和PD免疫激活的工程纳米清除剂。外泌体是一种经过充分研究的siRNA和化学药物的天然源载体，直径为30至100纳米。它具有一种膜结构，其表面特异性蛋白四asppanin CD9促进直接膜融合，并帮助内部物质直接运输到受体细胞的细胞质中，避免了溶酶体诱捕。

　　进一步有效地提供药物通过BBB和多巴胺能神经元,第一个过程的工程是构建壳,REXO一种靶向的未成熟树突状细胞(imDC)衍生的外泌体，该外泌体由狂犬病毒糖蛋白(RVG)肽修饰而成，具有29个氨基酸，能特异性结合神经元细胞和BBB表达的乙酰胆碱受体。由于外泌体很难同时装载亲水基因和疏水小分子药物，工程的第二个过程是作为一个基因-化学包覆核心的产品实现的，这是一个响应活性氧(ROS)的基因化学药物纳米复合物装载这两种不同特性的药物。第三种工艺是REXO-C/ANP/S纳米清除剂的制备。REXO被涂在纳米复合物上形成纳米清除剂。因此，该工程传递系统能够有效穿过血脑屏障，靶向神经元，并在多巴胺能神经元病变的高ROS环境中释放药物。富集的siSNCA和姜黄素对α-syn蛋白下调和α-syn聚集抑制具有协同作用。

　　杂化纳米粒子(NP) REXO-C/ANP/S的制备由两部分组成(图1A):基因化学核心C/ANP/S的制备和REXO的获取。核心C/ANP/S是通过两步法得到的。首先，我们合成了聚合物ba -聚(2-(二甲氨基)丙烯酸乙酯)(BAP)和bb -聚(2-(二甲氨基)丙烯酸乙酯)(BBP)(图S1A)。

　　第二部分是rvg修饰外泌体的制备REXO，使用频率为40 kHz、功率为100 W的bath超声器，通过超声波方法组装内芯和外部REXO(图1A)。。

　　分离并收集含有外泌体的指定编号7,8,9的片段。通过透射电子显微镜(TEM)确定imDC外泌体为囊泡结构，水动力直径约为70 nm, zeta电位为12.7 mV(图2E)。

　　DiD外泌体与硬脂酰rvgfitc的共定位系数为0.95(图S3E)，表明RVG成功修饰外泌体。

　　组装过程假设如图1B所示，并通过TEM、尺寸和zeta电位测量进行验证(图1C)。

　　当质量比为0.1时，最终的核-壳单分散组装形成如图1C (III)所示，这表明REXO被涂覆在核纳米配合物的表面。最终的NP REXO-C/ANP/S带负电荷7.1 mV，流体动力直径为118.1 nm(图1D)。

　　接下来，为了便于直观观察组装组分，制备了带正电的聚壳聚糖微球，允许带负电的组装体在表面吸附(图1E)。

　　外泌体用亲脂性染料DiI标记。结果清楚地显示了DiI外泌体、Cy5-siRNA和姜黄素的共定位(图1E和图S3F)。

　　加入NPs后，利用柯达体内成像系统FX Pro进行生物发光成像天辰娱乐_天辰娱乐_login注册登录-，检测Cy5平均荧光强度。REXO涂层显著增强了C/ANP/S中siRNA药物进入bEnd.3细胞。然后通过上皮细胞分化为SH-SY5Y细胞(图2A, II至IV)。作为比较,增加免费RVG肽抑制促进效应(图2,II IV)。通过比较的siRNA SH-SY5Y细胞在不同时间点(图2 b),发现REXO涂层显著提高药物的吸收在C / ANP / S。2小时后，EXO和REXO包衣组EXO-C/ANP/S和REXO-C/ANP/S显著优于裸姜黄素和siRNA(裸C + S)以及内核C/ANP/S。这是因为C/ANP/S中的季胺类化合物通过核内体-溶酶体途径将C/ANP/S内吞，造成NP外排和药物损失，因此药物积累随着时间的增加并不明显(图2B)。

　　共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)实验结果比较了两种体系的内吞机制(图2C)。

　　随着时间的延长，DiI的荧光增强，从5分钟到1小时，明显与深红色膜染色的荧光共定位(图2D和图S4B)。

　　α-syn聚集物是PD神经元的主要病理物质。因此，清除PD处理中的α-syn聚集物和多余的-syn非常重要(图3A)。

　　给药10次后记录行为。PD小鼠在开阔区域表现出运动迟缓，并且在中间区域行走较少(图4A, II)。

　　在开阔场地进行30分钟的定量数据显示，它们的总距离减小，移动速度减慢，所需的休息时间变长[图2]。4、B to D (II)。

　　在极点实验中，经过REXO-C/ANP/S处理后，到达杆尖的时间明显缩短(图4E)。

　　这种优势在小鼠解剖后的大脑切片中也得到了体现。注射REXO-C/ANP/S的PD小鼠神经元修复效果优于其他各组(图4,F和G)。

　　此外，hematoxylin对np处理过的小鼠脏器载玻片染色表明其安全性，不会对小鼠肝脏或其他脏器造成负担(图S7)。

　　通过对处理小鼠SN区进行染色，我们得出协新博2娱乐同载药C/ANP/S纳米复合物对TH+神经元α-syn有清除作用，但EXO-C/ANP/S和REXO-C/ANP/S的清除作用更明显，特别是靶向NP REXO-C/ANP/S(图5,a和C)。这是由于靶向外泌体优越的递送优势。此外，我们还探索了小鼠免疫微环境的改善。结果表明，imDC外泌体的作用可以清除PD小鼠的T细胞激活。在小鼠经NPs处理后，我们发现EXO-C/ANP/S，特别是REXO-C/ANP/S可以显著增加CD4阳性(CD4+) T细胞中Fox p3的表达(图5,B和D)。

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　　此外，REXO-C/ANP/S可显著增加PD中TGF-和IL-10(图5,E, F)。已有研究证实TGF-信号具有抗炎作用，主要是神经保护作用。此外，IL-22和IL-17与自身免疫性疾病相关，并以免疫细胞因子的形式高表达。激活的TH17细胞分泌并产生IL-22和IL-17免疫细胞因子。结果表明，REXO-C/ANP/S可显著降低PD中IL-22和IL-17因子(图5,G和H)。